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蛋白質組學和代謝組學 修飾蛋白質組學 蛋白質修飾位點鑒定

蛋白質修飾位點鑒定 技術參數 常見問題 留言咨詢

     蛋白磷酸化作為蛋白質翻譯后修飾方式的一種,在細胞的調節過程中發揮著重要作用。研究蛋白質的磷酸化機制,有助于科學家對信號轉導途徑,疾病的分子機理以及新型激酶抑制劑的開發等有更深入的了解。由于蛋白質磷酸化的豐度低,大量非磷酸化肽段的信號抑制了磷酸化肽段的信號,所以常常需要對磷酸化蛋白質或肽段富集后再進行質譜鑒定。樣品酶切后的產物由二氧化鈦進行磷酸化肽的富集,富集后由高精度的質譜分析,分析數據由生物信息學軟件進行數據檢索。

實驗流程


 

技術平臺

       Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion?和Tribrid?

技術優勢 

       針對不同的修飾類型采取不同的富集方式

       富集效率高,可提高修飾肽段檢測效率

       基于高精度的質譜分析,對修飾位點精確鑒定
       大
規模的蛋白質組修飾位點的鑒定與分析

       可鑒定多種修飾類型

鑒定類型

       單一或混合蛋白的磷酸化、N-糖基化、泛素化、乙酰化、甲基化等修飾位點鑒定

服務內容

       單一蛋白的修飾位點鑒定;

       高通量蛋白質組修飾譜分析。

應用領域

       疾病機理研究

       個性化醫療

       農業品種改良

       信號轉導途徑分析



送樣要求

樣品類型

樣品要求(/組樣品)

備注

蛋白質溶液

蛋白質總量≥300μg

重復實驗則量翻倍,建議準備兩份樣品備用。

組織樣品

樣品總量≥0.1g

按照蛋白質組織提取效率(蛋白:組=7%

細胞樣品

細胞數量≥10E7

胰酶消化,按細胞凍存標準離心收集細胞即可。

體液樣品

清≥200μL,腦脊液≥200μL,尿液≥1mL ,淚液≥1mL.

 


1、 通過其他實驗方法驗證了目標蛋白質存在特定修飾,但是為什么質譜鑒定未檢測到該修飾和修飾位點?

        該修飾蛋白質可能屬于低豐度蛋白質,未經任何方法富集的話,修飾蛋白質很難檢測到。


2、蛋白樣品修飾位點全譜鑒定的技術原理?

        首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度,然后通過高質量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,最后上樣至液相色譜-串聯質譜中進行分析,通過相應的數據庫檢索匹配,一次可鑒定成百上千個修飾位點。

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